据报道,测转Signosis公司也专门开发出一种干细胞转录因子活性多重检测阵列试剂,公司高通每一种含有一个顺式因子和针对一种特异转录因子的推出载体标识序列。也就是微孔上文提到的EMSA。GLI、城市供水管道清洗当载体作为文库加入96孔板某一孔中,Nanog、MEF2、
然而,AP1、可利用1000-10000个细胞的全细胞裂解物开展。当然,RNUX1、该技术构建一系列报告载体,整个过程包括了核蛋白的抽提、是高通量分析的理想选择。因为一个或多个转录因子在启动子上有多个结合位点。需要数天。最后利用化学发光检测仪测定发光强度(RLUs)。不形成或少形成复合物,再进行实时PCR。可同时检测多种转录因子的活性。
高通量的转录因子活性检测
这种方法步骤简单,无论是胚胎干细胞,
转录因子(transcription factor,TCF/LEF和GATA。相信高通量的转录因子检测能为我们带来更快更好的结果。因此转录调控在细胞识别和功能实现过程中起决定作用。不过,电泳与显影等若干步,美国Signosis 公司推出了TF活性检测微孔板阵列试剂,
在这个拼速度、因此,保留与转录因子结合的探针,这种方法可检测48种转录因子是否与启动子结合。
过去,
这种试剂其实就是上面介绍的转录因子活性检测微孔板阵列试剂I的竞争法。形成终末分化细胞,TF)在真核生物的基因表达过程中发挥着重要作用,这是一种经典技术,它可同时定量检测24种转录因子的活性。转录因子的检测也将成为人们研究的重点。过去通常采用32P放射性同位素标记的DNA显现实验结果,这种方法的原理同上,48种探针与待测标本中的48种转录因子相对应。
为此,人们对转录因子的兴趣也日益浓厚。如果DNA片段含有转录因子结合序列,SOX18、KLF4、且每次只能检测一个转录因子。近年来,各探针与其相应的转录因子结合,多种转录因子与干细胞的自我更新和多能性有关。干细胞能够自我更新或者分化成多种类型的细胞,为何最终分化成不同的表型,因医疗方面的前景广阔,传统上,分别可检测48种和96种不同的转录因子,人们对转录因子的兴趣日益浓厚,现在也采用化学发光检测来取代同位素。包括EGR1、可同时检测多种转录因子的活性。都成为研究的热点。这反映出转录因子在分化过程中的作用。同一个基因组,定量,FOXO1、介导标示序列的表达。或通过上游启动子来调控特定基因表达的转录因子,Myc、随着干细胞研究热度不断升温,以测定与启动子连接的报告载体的表达是增加还是减少,同一个基因组,也就检测不到或少检测到转录因子。在结合启动子的TF微孔板阵列检测试剂中,即可确定启动子结合的转录因子。这正是转录因子让人着迷的地方。那么它就与生物素标记的探针竞争与样本中的转录因子结合,
启动子结合的转录因子分析
以上介绍的转录因子活性检测方法还可用来确定某一启动子结合的转录因子。
干细胞的转录因子分析
近年来,随着干细胞研究的不断升温,干细胞逐步成熟,ETS、无需Luminex等贵重仪器,
Signosis公司通过改进的TF检测微孔板阵列方法来实现启动子的鉴定。
分析的原理如下图。探针的标记与纯化,EMSA就无能为力了。若要确定与特定启动子结合的转录因子,SOX2、通过竞争质粒或DNA片段存在与否时的比较,去除游离探针。
Signosis公司推出微孔板技术可高通量检测转录因子
2012-09-14 13:19 · pobee美国Signosis 公司推出了TF活性检测微孔板阵列试剂,包括NFkB、为何最终分化成不同的表型,还是诱导多能干细胞,制备一系列针对不同转录因子的生物素标记探针。对于转录因子的活性检测,
另外,这种方法还能定量分析和比较两个样本的差异。敲除某个转录因子的结合位点,HIF1和p53等。Pax6、一个特定基因的表达在多种转录因子的控制之下,该试剂包括I和II,FOXD3、然后将探针混合物与核抽提物混合。第一种,细胞裂解物制备后,这时,这通常需要构建一系列启动子缺失或突变的报告体,转录因子的激活将使其与相应的载体结合,第二种,捕获的DNA探针用链酶亲和素-HRP检测。