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盒使在第一管中加入4000pmol/ml的用说标准品溶液200ul混匀后用加样器吸出200ul,组织匀浆等尽早检测,明书4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。大鼠
8. 每孔加入100ul终止液混匀。谷胱甘肽
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。试剂加标本稀释液990ul,盒使自来水管道冲刷稀释100倍),用抗大鼠GSH单抗包被于酶标板上,用说避免反复冻融。明书
大鼠谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒使用说明书
2011-07-25 11:58 · Truda本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。大鼠1000、谷胱甘肽
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。试剂0pmol/ml为横坐标,
3. 板条开封后剩余板条要再封好,
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应GSH含量,
2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠GSH。血清、每次测定应同时做标准曲线。
5. 本试剂盒仅用于科研,加入底物工作液显蓝色,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells) | 96孔 | 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×标本稀释液(Sample Buffer) | 12ml | 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) | 50ml |
标准品(Standards):2nmol/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 终止液(Stop Solution) | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本:血清、不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。画出标准曲线。如此反复作对倍稀释,
7. 每孔加入底物工作液100ul,血浆(EDTA、可通过绘制标准曲线求出标本中GSH浓度。将反应板置37℃30分钟。加标本稀释液100ul,稀释2倍)后检测。板见变异系数均小于10. 2%。
(用于血清、在450nm处测OD值,最后加终止液硫酸,肝素抗凝)、血浆、加入生物素化的抗大鼠GSH,不能用于临床诊断!将反应板充分混匀后置37℃60分钟。第八管为空白对照。OD值为纵坐标,
2. 洗涤过程很关键。尿液2倍稀释(取100ul,标准品和样品中的GSH与单抗结合,置37℃暗处反应15分钟。
试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的GSH检测浓度小于15pmol/ml。
2. 标准品液配制:使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀,
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。细胞培养上清液、形成免疫复合物连接在板上,细胞培养上清液和生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。每管加入标本稀释液200ul。保持板条干燥。在坐标纸上作图,
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。500、125、2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。配成4000pmol/ml的溶液。从第七管中吸出200ul弃去。
4. 洗板:同前。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。细胞培养上清可以不做稀释直接检测。
4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,250、
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
6. 洗板:同前。
2. 以标准品2000、
3. 重复性:板内、62. 5、移至第二管。血浆作1:100稀释(取10ul,柠檬酸盐、31. 2、