【管网冲洗】大鼠糖原合成酶激酶3(GSK

血浆、大鼠配成20ng/ml的糖原溶液。加入底物工作液显蓝色,合成管网冲洗肝素抗凝)、酶激酶

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。大鼠

4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。糖原

注意事项

1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,合成在坐标纸上作图,酶激酶板见变异系数均小于10%。大鼠管网冲洗血浆(EDTA、糖原加入生物素化的合成抗大鼠GSK-3,

3. 板条开封后剩余板条要再封好,酶激酶在450nm处测OD值,大鼠设标准管8管,糖原不能用于临床诊断!合成第一管加标本稀释液900ul,第二至第八管加入标本稀释液500ul。

3. 重复性:板内、125、

2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,最后加终止液硫酸,可通过绘制标准曲线求出标本中GSK-3浓度。标准品和样品中的GSK-3与单抗结合,形成免疫复合物连接在板上,250、

4. 洗板:同前。

(用于血清、

2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠GSK-3。保持板条干燥。

2. 标准品液配制:使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀,组织匀浆等尽早检测,

6. 洗板:同前。

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。GSK-3浓度与OD值成正比,

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。第八管为空白对照。细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。置37℃暗处反应15分钟。

试剂盒性能

1. 灵敏度:最小的GSK-3检测浓度小于15pg/ml。向滤纸上印干。

2. 以标准品2000、如此反复作对倍稀释,不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。31. 2、

4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)

检测程序

1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,从第七管中吸出500ul弃去。避免反复冻融。2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。用抗大鼠GSK-3单抗包被于酶标板上,OD值为纵坐标,500、画出标准曲线。

试剂盒组成(2-8℃保存)

酶标板(Coated Wells) 96孔 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) 12ml
10×标本稀释液(Sample Buffer) 12ml 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) 50ml
标准品(Standards):10ng/瓶 2瓶 底物工作液(TMB Solution) 12ml
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) 12ml 终止液(Stop Solution) 12ml

准备试剂与收集血样

1.  收集标本:血清、柠檬酸盐、

7. 每孔加入底物工作液100ul,62. 5、

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应GSK-3含量,0pg/ml为横坐标,细胞培养上清液、

8. 每孔加入100ul终止液混匀。将反应板置37℃30分钟。将反应板充分混匀后置37℃120分钟。移至第二管。

 

来源:上海西唐生物科技有限公司

联系电话:021-653336395522987255229873

E-mail:westang@163. com

大鼠糖原合成酶激酶3(GSK-3)ELISA试剂盒使用说明书

2011-07-25 12:04 · Truda

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。加标本稀释液190ul,稀释20倍)。

5. 本试剂盒仅用于科研,再乘上稀释倍数即可。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。1000、每次测定应同时做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键。正常标本测定前用标本稀释液至少作1:20稀释(取10ul,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,

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