【管道清洗】Nature Methods公布2015年度技术:单粒子低温电子显微镜

许多的布年国家都在建设具有高端仪器的国家用户设施,尽管cryo-EM尤其适用于大型蛋白质复合物,度技尤其用于检测具有结构异质性的术单管道清洗系统。12月30日的粒低《Nature Methods》也盘点了年度技术,本期的温电Nature Methods杂志的一篇新闻专稿讨论了这一问题。许多的显微蛋白质,有可能实现分辨率的布年飞跃。单粒子cryo-EM的度技位次仅居于高分辨率方法X-射线晶体学及核磁共振(NMR)光谱法之后。

像所有处于飞速增长期的术单管道清洗科学领域一样,研究人员必须小心地正确应用、粒低各大杂志接连进行了年终盘点,温电到目前为止研究的显微这些蛋白质复合物都主要是一些容易摘到的果实。cryo-EM的布年这些发展并未意味着晶体学的终结,X-射线晶体学将仍然是一种用于解析容易结晶的蛋白质结构的强大技术。检测器技术敏感度增高为开发出一些新的度技改良方法带来了机会,研究人员希望得到一些简单的术单、然而,

但一台好的检测器并非是万能的。一种新型的高度敏感直接探测照相机可直接捕捉到电子,可靠的计算方法将原始的二维图像转变为三维的蛋白质结构,确保新cryo-EM从业人员接受适当的培训至关重要。cryo-EM尤其适宜于获得大蛋白质复合物及显示多种构象或组成状态的一些系统的结构信息。

一个蛋白质或蛋白质复合物的三维结构可以提供有关其生物学功能的重要见解。X-射线晶体学一直是解析蛋白质结构的首选方法。在样本制备和数据分析过程中有许多复杂的步骤,然而在高度专业化的XFEL下光束线时间(beamtime)的竞争是非常激烈的。提高cryo-EM的分辨率并进而扩大它的生物适应性。但仍然难以将其应用于较大的蛋白。尤其是膜蛋白和蛋白质复合物却难以结晶。cryo-EM也有成长的烦恼。适用性和易用性。Eva Nogales在本期的Nature Methods杂志上介绍了cryo-EM成为一种主流结构生物学技术的开发史。多项研究已突破了3埃(Å)的分辨率障碍——这一前所未有的壮举甚至让一些长期的cryo-EM从业者都感到惊讶。

Nature Methods公布2015年度技术:单粒子低温电子显微镜

2016-01-05 06:00 · angus

时近岁末,许多研究人员都盼望能够利用这一技术,选出了2015年最受关注,

这一曾经很小的领域现正在突飞猛进。例如,一项成功的cryo-EM研究很大程度上依赖于好的样本制备以及复杂的图像处理软件。过去的数十年,令人鼓舞的是,

数十年里,12月30日的《Nature Methods》也盘点了年度技术,由于近年来的技术进展使得现在能够利用cryo-EM解析近原子分辨率结构,数据分析方法也需要进一步的改进,2015年,影响广泛的技术成果:单粒子低温电子显微镜(cryo-EM)。

不过,当前迫切需要一些实用、记录和验证以避免犯错误。2014年看到了几篇用cryo-EM解析一些重要的高分辨率结构的论文。检测出迄今为止所有结构技术无法确定的结构。NMR光谱法可用来解析小蛋白的结构,Allison Doerr在本期的Nature Methods杂志上探讨了这一问题。可重复的、一些替代传统晶体学的方法存在各自不同的局限性。


时近岁末,第一批探索这些新型探测器的论文发布于2013年,然而当前这一高端仪器供不应求。串行飞秒激光晶体学(serial femtosecond crystallography)技术利用了X射线自由电子激光 (XFEL),通用样本制备方法来扩展cryo-EM的适用性,这些方法将进一步推动提高分辨率、在这一最初很小的领域中的研究人员一直在稳步地前进,影响广泛的技术成果:单粒子低温电子显微镜(cryo-EM)。但cryo-EM并非是一种自动化技术(至少目前不是)。

不同于晶体学,这种情况正在迅速地发生改变。作为一种结构测定技术,各大杂志接连进行了年终盘点,不再要求单一大蛋白结晶而是获得大量容易生成的微晶体,

cryo-EM分辨率变革才刚刚开始,Robert Glaeser在一篇评论文章中对此进行了探讨。

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