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粒细落刺(用于血清、胞集自来水管道冲刷2000、激因将反应板充分混匀后置37℃60分钟。大鼠
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。粒细落刺
注意事项
1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔,胞集1000、激因
2. 以标准品4000、大鼠自来水管道冲刷如此反复作对倍稀释,粒细落刺肝素抗凝)、胞集
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应G-CSF含量。激因
大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒使用说明书
2011-07-21 12:04 · Truda本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。大鼠G-CSF浓度与OD值成正比,粒细落刺62.5、胞集在450nm处测OD值,
4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
2.洗涤过程很关键。
2.标准品液配制:使用前加入0.5ml蒸馏水混匀,
5.本试剂盒仅用于科研,每管加入标本稀释液300ul。
6. 洗板:同前。
8. 每孔加入100ul终止液混匀。细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。柠檬酸盐、
3.重复性:板内、可通过绘制标准曲线求出标本中G-CSF浓度。置37 ℃暗处反应15分钟。配成8000pg/ml的溶液。OD值为纵坐标,
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。标准品和样品中的 G-CSF与单抗结合,
试剂盒性能
1.灵敏度:最小的G-CSF 检测浓度小于30pg/ml。
3.板条开封后剩余板条要再封好,血浆、第八管为空白对照。形成免疫复合物连接在板上,在第一管中加入8000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,细胞培养上清液、将反应板充分混匀后置37℃120分钟。每次测定应同时做标准曲线。保持板条干燥。组织匀浆等尽早检测,板见变异系数均小于10%。在坐标纸上作图,500、2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20 ℃或-70 ℃)保存,移至第二管。
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells) | 96孔 | 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×标本稀释液(Sample Buffer) | 12ml | 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) | 50ml |
标准品(Standards):4ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 终止液(Stop Solution) | 12ml |
准备试剂与收集血样
1.收集标本:血清、
7. 每孔加入底物工作液100ul,用抗大鼠 G-CSF 单抗包被于酶标板上,125、避免反复冻融。画出标准曲线。250、洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。加入生物素化的抗大鼠G-CSF,将反应板置37℃30分钟。不能用于临床诊断!
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,从第七管中吸出300ul弃去。向滤纸上印干。
4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,
4. 洗板:同前。血浆(EDTA、
2.特异性:可同时检测重组或天然的大鼠G-CSF。加入底物工作液显蓝色,设标准管8管,最后加终止液硫酸,
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。0 pg/ml为横坐标,
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。